色譜工作者常會碰到這樣的問題,什么時(shí)候該換
Inertsil色譜柱了? 色譜柱的塔板數(shù)能體現(xiàn)色譜柱的狀態(tài)嗎?確定表明一支色譜柱應(yīng)該“退休”的標(biāo)準(zhǔn),從經(jīng)驗(yàn)來看,當(dāng)一支色譜柱的塔板數(shù)降低到新柱子時(shí)的百分之多少時(shí)就可以認(rèn)為該色譜柱不能再使用了呢?
塔板數(shù)是一個粗略的指標(biāo),不能作為評價(jià)色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。通常使用塔板數(shù)來考察色譜系統(tǒng):將新柱子接到儀器上,根據(jù)色譜柱生產(chǎn)商提供的測試條件測試該色譜柱,你應(yīng)該得到和分析報(bào)告上同樣的結(jié)果。
差的也應(yīng)該得到比報(bào)告值低10%的塔板數(shù)。如果你所測得的塔板數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于廠家提供的報(bào)告數(shù)據(jù),這就說明你的色譜系統(tǒng)可能存在一些問題。進(jìn)樣器、柱外效應(yīng)、毛細(xì)連接以及檢測器都是容易出現(xiàn)問題的地方。
相信每個色譜工作者都會關(guān)心分辨率,分辨率是考察一根Inertsil色譜柱分離具體樣品的好壞程度的指標(biāo)。色譜的核心任務(wù)就是為了使每個峰完成分離,我們在實(shí)際工作中需要得到合理峰寬的窄峰以便獲得較低的檢測限(這已經(jīng)不是什么難題,現(xiàn)在的色譜柱都可以達(dá)到這個要求)。
然而,我們需要考慮的另一個因素是塔板數(shù)對分辨率的影響僅僅是平方根的關(guān)系,這意味著當(dāng)一根色譜柱的塔板數(shù)下降50%,分辨率僅僅下降7%。而當(dāng)一根色譜柱塔板數(shù)下降為新柱子一半的時(shí)候,你肯定看到了其它更加嚴(yán)重的癥狀告訴你這根色譜柱的壽命不長了。
其實(shí),大多數(shù)用戶僅僅使用色譜柱塔板數(shù)的一小部分。例如,對一支新的150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱來講,廠家測試報(bào)告上的塔板數(shù)為14,000。
一支150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱的柱效大約為9000,比廠家測試數(shù)據(jù)低30%。在實(shí)際的工作中,大多數(shù)色譜方法僅僅需要這些塔板數(shù)的一半,這些色譜方法還有優(yōu)化的空間嗎?答案是肯定的。可見,色譜柱的塔板數(shù)不是分離中重要的參數(shù)。
較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標(biāo)來考察一根色譜柱的狀態(tài)。壓力的測量是zui容易的,通常我們確定的色譜方法要滿足以下的要求:用新柱子時(shí)柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過3000psi。
盡管現(xiàn)代的液相色譜系統(tǒng)都可在更高的壓力下使用,但由于高壓產(chǎn)生的系統(tǒng)損耗和泄漏的問題會很嚴(yán)重。當(dāng)壓力超過3000psi時(shí),考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。
如果更換濾片后壓力仍然高,則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經(jīng)被污染,這提示我們該換柱子了。有統(tǒng)計(jì)表明,超過60%的色譜柱損壞是由于壓力過高的原因。